期刊简介
本刊紧跟医学发展趋势，对医学热点予以适时追踪，内容新颖、及时，信息量大，学术水平较高。以从事医疗、科研工作者为读者对象，以报道医学领域的重大科研成果、国家重点课题的医学进展、医疗新技术和诊疗经验为主要内容，突出科学性、先进性、创新性和实用性，促进医学领域的学术交流。
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- 杂志名称：医学研究杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中国医学科学院
- 国际刊号：1673-548X
- 国内刊号：11-5453/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：期刊收录：统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 剑桥科学文摘, 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏
慢病毒介导不同启动子嵌合抗原受体CD19在T细胞中的表达
林兰；徐之良
关键词：启动子, 绿色荧光蛋白, 重组慢病毒载体, T淋巴细胞
摘要：目的 高效包装含绿色荧光蛋白(GFP)的嵌合性抗原受体CD19重组慢病毒载体,对比不同启动子在T细胞中绿色荧光蛋白的表达效率.方法 构建3种不同启动子及CD19-CAR的质粒pHAGE-CMV-EF1α-GFP-CD19、pHAGE-CMV-GFP-CD19、pHAGE-EF1α-GFP-CD19,转染293T细胞,镜下观察转染的细胞状态,72h后收集上清,PCR定量病毒载体RNA核酸拷贝数,通过流式细胞术以及Western blot法测定单、双启动子启动GFP及CD3ζ的表达情况;慢病毒液分别转染T淋巴细胞后,通过荧光显微镜检测慢病毒转染效果,Western blot法测定蛋白的表达水平.结果 荧光显微镜观察:以293T细胞为靶细胞时,启动子由强到弱依次为CMV-EF1α＞CMV ＞EF1α,流式结果显示,在293T细胞中的转导率分别为72.4％、20.6％、14.5％;Western blot法检测结果显示,在T细胞中启动子表达强弱为CMV-EF1α ＞EF1o＞CMV.结论 在以重组慢病毒为载体的基因研究过程中,为了提高病毒在感染细胞的转染率,需要正确选择启动子以及相应的靶细胞.
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